单克隆抗体是由单一B体细胞复制造成的高宽比均一、仅对于某一特殊抗原表位的抗原。一般选用杂交瘤技术性来制取,杂交瘤(hybridoma)抗原技术性是在细胞融合技术性的基本上,将具备代谢特异性抗原工作能力的致敏B体细胞和具备无尽繁育工作能力的骨髓瘤细胞结合为B体细胞杂交瘤。
用具有这类特点的单独杂交瘤细胞塑造成体细胞群,可制取对于一种抗原表位的特异性抗原即单克隆抗体。
单克隆抗体界定
单克隆抗体是人力制取的杂交瘤细胞生产的,杂交瘤细胞是由一个经抗原体激话后的B体细胞与一个骨髓瘤细胞结合产生。单克隆抗体优势:纯净度高,敏感度高,特异性强,交叉式反映少,制取的低成本。缺陷:对技术性有一定的规定,并且根据抗原体的有机化学解决非常容易遗失表位。
单克隆抗体制取全过程
1.免疫力小动物
免疫力小动物是用目地抗原体免疫力小白鼠,使小白鼠造成过敏反应B淋巴细胞的全过程。一般采用6-8周龄雌虫BALB/c小白鼠,依照事先制订的免疫力计划方案开展免疫力注射。抗原体根据血液循环系统或血循环进到颈静脉免疫器官,刺激性相对B淋巴细胞复制,使其活性、繁衍,并分裂变成过敏反应B淋巴细胞。
2.细胞融合
选用二氧化碳汽体处决小白鼠,无菌操作原则取下肝脏,在平皿内挤压成型碾磨,制取脾体细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小白鼠脾体细胞按一定占比混和,并添加促结合剂聚乙二醇。在聚乙二醇功效下,各种各样网织红细胞可与骨髓瘤细胞产生结合,产生杂交瘤细胞。
3.可选择性塑造
可选择性塑造的目地是挑选结合的杂交瘤细胞,一般选用HAT可选择性培养液。在HAT培养液中,未结合的骨髓瘤细胞因欠缺次黄嘌呤-鸟嘌呤-硫酸铵核糖转移酶,不可以运用挽救方式生成DNA而身亡。未结合的网织红细胞虽具备次黄嘌呤-鸟嘌呤-硫酸铵核糖转移酶,但其自身不可以在身体之外长期性生存也慢慢身亡。仅有结合的杂交瘤细胞因为从脾体细胞得到了次黄嘌呤-鸟嘌呤-硫酸铵核糖转移酶,并具备骨髓瘤细胞能无尽繁衍的特点,因而能在HAT培养液中生存和繁衍。